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寬分子量非變性電泳蛋白質Marker III(21-1000 kD)

寬分子量非變性電泳蛋白質Marker III(21-1000 kD)

產(chǎn)品編號:RTD6104

產(chǎn)品規(guī)格:20次

數(shù)量
價格 ¥600

寬分子量非變性電泳蛋白質Marker III21-1000 kD

Broad MW Native Electrophoresis Protein Marker III21-1000 kD

貨號

名稱

規(guī)格

RTD6104

寬分子量非變性電泳蛋白質Marker III21-1000 kD

20次(100 μl

●儲存、運輸及效期:

-20℃保存;濕冰運輸;有效期為12個月。

●技術規(guī)格:

技術規(guī)格

主條帶數(shù)量

8

貯存緩沖液

50 mM Tris-HCl pH7.5,15%甘油,穩(wěn)定劑,溴酚藍

濃度

0.2-0.4 μg/μl

上樣前處理

溶化混勻后直接上樣,不要加熱處理

推薦凝膠體系

8%4-15%Tris-甘氨酸非變性凝膠

推薦上樣體積

5 μl1mm厚度10齒梳子)

推薦染色方法

非預染Marker,電泳時不可見條帶,電泳后需要考馬斯亮藍染色可以觀察條帶

不適用于變性電泳

為非變性Marker,不適用于變性電泳

產(chǎn)品簡介:

    本產(chǎn)品有5種蛋白組成,分子量范圍為21-1000 kD,經(jīng)過非變性電泳后,用考馬斯亮藍染色后可以得到8條主帶。

蛋白名稱

分子量(kD)

蛋白來源

pI

說明

Ferritin

~440

~880

~1000

equine spleen

N/A

非變性下440 kD,880 kD1000 kD

RC2

~200

重組蛋白

6.7

單體蛋白分子量為75 kD,在Tris-甘氨酸非變性下表現(xiàn)為分子量~200 kD

RC1

~66

~132

重組蛋白

4.7

單體蛋白分子量為~66 kD,在Tris-甘氨酸非變性下表現(xiàn)為單體(分子量~66 kD)和二聚體(分子量~132 kD

Ovalbumin

~45

egg white

5.2

球蛋白,分子量為45 kD,非變性條件下大于45 kD會出現(xiàn)電荷異構體(charge isomer,分子量~50 kD

Trypsin Inhibitor

~21

Soybean

4.5

非變性下分子量~21 kD

使用說明:

1. 取出產(chǎn)品后,常溫溶化后,徹底混勻,上樣電泳。

注:上樣量根據(jù)膠的厚度和梳子的寬度確定。一般說來,1.0厚度10齒梳子加樣孔上樣5 μl,1.0厚度15齒梳子加樣孔上樣量2.5 μl,其他規(guī)格梳子請適當調整上樣量。

2. 該產(chǎn)品不含蛋白凝膠制備試劑,您可以選擇非變性PAGE凝膠制備及電泳試劑盒(貨號:

RTD6130或RTD6135)。如自備試劑,經(jīng)典Laemmli系統(tǒng)中把制膠溶液、電泳緩沖液和上樣緩沖液中的SDS和還原劑(DTT或β-巰基乙醇)全部去除即可進行非變性電泳。

3. 電泳條件:

建議使用8%,10%非變性膠或者4-15%梯度非變性膠(貨號:RTD6117-0415)進行電泳。

恒電壓

120 V

起始電流

27-35 mA/板膠

結束電流

7-10 mA/板膠

電泳時間

50-60 min

4. 電泳結束后,考馬斯亮藍染色,觀察結果。

注:使用銀染染色時,由于靈敏度高于考馬斯亮藍染色方法,需要適當降低Marker上樣量,一般稀釋50倍后上樣。

● 注意事項:

1. 該產(chǎn)品僅適用于酸性蛋白非變性電泳,不適用于變性電泳和堿性蛋白非變性電泳。非變性蛋白電泳條件下,不能精確判斷蛋白的分子量大小,更多是作為相對參照。因為在非變性條件下,蛋白的電荷,空間結構,物化性質等都對蛋白的遷移有影響,所以非變性電泳的蛋白分子量需謹慎解讀并結合其他方法(如SEC-HPLC)驗證。

2. 非變性蛋白電泳Marker由于要保持蛋白的天然結構,都沒有偶聯(lián)染料,在電泳時基本都看不到條帶;但是RTD6104中的440 kD由于天然蛋白中含有鐵離子,使得電泳后在膠上可見淡黃色,凝膠轉膜后,膜上也可以看到黃色的440 kDa條帶,可以大體判斷Marker轉膜的效果。

3. 非變性蛋白Marker轉膜后可以用麗春紅染色液(貨號:RTD6301)染膜,可以看到Marker條帶,順便可以檢測轉膜效率,然而要注意的是麗春紅染色靈敏度比較低,可能不能完全看到完整的Marker條帶。

4. 推薦使用8%,10%(貨號:RTD6130)或者4-15%的非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(貨號:RTD6135)。其他濃度并非不適用,因為非變性蛋白Marker遷移率不僅受分子量影響,還受其他因素影響,所以在不同濃度的凝膠中,分子量標記的遷移位置會變化,主帶的電荷異構體的表觀分子量也會變化。

實驗示例:

4-15%Tris-甘氨酸非變性

2 4-16% Blue Native gel



 
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