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Picogreen雙鏈 DNA(dsDNA)定量試劑

Picogreen雙鏈 DNA(dsDNA)定量試劑

產(chǎn)品編號(hào):GR005-02

產(chǎn)品規(guī)格:5×100μl

相關(guān)規(guī)格:
數(shù)量
價(jià)格 ¥1600

Picogreen雙鏈 DNAdsDNA)定量試劑

Picogreen dsDNA Quantitation Reagent

Ver750452-1.0

●  產(chǎn)品規(guī)格:

貨號(hào)

產(chǎn)品名稱

包裝

GR005-01

Picogreen雙鏈 DNAdsDNA)定量試劑

0.1 ml

GR005-02

Picogreen雙鏈 DNAdsDNA)定量試劑

5×0.1 ml

簡介:

Picogreen 是一種極為靈敏的熒光核酸染料,其僅在與DNA 雙鏈結(jié)合后才發(fā)出熒光,且所產(chǎn)生的熒光與 DNA 濃度呈正比,因而可用于精確測量多個(gè)來源的 dsDNA,包括基因組 DNA、病毒 DNA、PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物、測序文庫等。本產(chǎn)品定量具有以下優(yōu)勢:1. 靈敏度高:可檢測低至200 pg的dsDNA,節(jié)省寶貴樣品;2. 特異性強(qiáng):在等摩爾的RNA存在的條件下,對dsDNA具有特異性;3. 耐受性好:耐受較高濃度的鹽、尿素、乙醇、氯仿、去垢劑、蛋白或瓊脂糖,可以直接定量PCR擴(kuò)增產(chǎn)物而無需從反應(yīng)混合物中純化DNA。4. 易于使用-只需在樣品中加入染料,等待5分鐘,然后讀數(shù)即可,且適用于96和384孔板;與大多數(shù)基于熒光的酶標(biāo)儀和熒光計(jì)兼容。5. 適用范圍廣:可適用于PCR的分析、芯片樣品、DNA損傷分析、酶活分析、基因組DNA定量以及復(fù)雜混合物中dsDNA的檢測和病毒DNA定量等多種領(lǐng)域。

●  貯存、效期及運(yùn)輸:

-20℃避光保存;有效期2年;濕冰運(yùn)輸。

●  使用方法:

注:本方法參照 2010《中國藥典》進(jìn)行操作。

1.染料工作液的配置:

PicoGreen dsDNA 定量試劑取出后平衡至常溫,該試劑是以 0.1 ml 200×的濃縮液形式保存于DMSO中的。實(shí)驗(yàn)當(dāng)天,根據(jù)實(shí)驗(yàn)用量用 1×TE(10 mM Tris-HCl,1 mM EDTA,pH 7.5)按 1:200 的比例稀釋 PicoGreen 濃縮液。注意事項(xiàng):

1.1 由于試劑容易吸附到玻璃表面,要在塑料容器中配制。

1.2  PicoGreen試劑見光易分解,所以應(yīng)將配好的溶液用鋁箔包住或放置暗處避光保存。

1.3 溶液最好在配制好數(shù)小時(shí)內(nèi)使用,以保證最佳結(jié)果。

2.標(biāo)準(zhǔn)品工作液的配制:

取λ DNA 標(biāo)準(zhǔn)品(貨號(hào):RTL6101),用無菌 TE buffer 配制成100 μg/ml 的標(biāo)準(zhǔn)品工作液。

注:標(biāo)準(zhǔn)品也可用其他已知濃度的純化 DNA;有一些產(chǎn)品描述可使用小牛胸腺 DNA 作為標(biāo)準(zhǔn)品,按照我們實(shí)際操作經(jīng)驗(yàn),并不推薦它作為標(biāo)準(zhǔn)品。

3.標(biāo)準(zhǔn)品工作液稀釋:

3.1 母液稀釋:使用 TE 緩沖液將 100 μg/ml 的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋為 2 μg/ml。

3.2 梯度稀釋:參照下表,對DNA 標(biāo)品母液進(jìn)行梯度稀釋。

TE 體積(μl

2 μg/ml DNA 標(biāo)準(zhǔn)品母液(μl

Picogreen 染料工作液(μl

DNA標(biāo)準(zhǔn)品終濃度

0

1000

1000

1000 ng/ml

900

100

1000

100 ng/ml

990

10

1000

10 ng/ml

999

1

1000

1 ng/ml

1000

0

1000

Blank

3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備:

向經(jīng)稀釋的各梯度標(biāo)準(zhǔn)品溶液中加入1000 μl 染料工作液混勻,避光常溫孵育5 min。使用酶標(biāo)儀或熒光計(jì)檢測熒光強(qiáng)度(Ex=480 nm,Em=520 nm);將溶液加入比色皿或取200 μl加入微孔板,確信不要在樣品中引入氣泡;以 1×TE 緩沖液空白對照,測定標(biāo)準(zhǔn)品熒光值;用標(biāo)準(zhǔn)品溶液的濃度(ng/ml)對應(yīng)的熒光強(qiáng)度作直線回歸,制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。

3.4 測量剩余樣品的熒光值:熒光計(jì)將給出一個(gè)直接的濃度讀數(shù),數(shù)據(jù)可以用來產(chǎn)生 DNA 濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線。


 
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