2×pfu PCR MasterMix
● 產(chǎn)品包裝：
|
|
目錄號
|
包裝
|
|
2×pfu PCR MasterMix（不含染料）
|
RTH3103-02
|
500μl
|
|
RTH3103-03
|
5×500μl
|
|
2×pfu PCR MasterMix（含染料）
|
RTH3104-02
|
500μl
|
|
RTH3104-03
|
5×500μl
|
注：以50μl PCR反應(yīng)體系為例，每次使用25μl 2×MasterMix，500μl可做20次 50μl PCR反應(yīng)。
● 儲(chǔ)存條件: -20℃可長期保存；4℃穩(wěn)定貯存3個(gè)月。經(jīng)常使用時(shí)，一旦融化后請4℃貯存，盡量避免反復(fù)凍融。
● 產(chǎn)品簡介：
本產(chǎn)品包含pfu DNA聚合酶、dNTPs、Mg2+、反應(yīng)緩沖液、PCR反應(yīng)的增強(qiáng)劑和優(yōu)化劑以及穩(wěn)定劑，濃度為2×。使用時(shí)，只需補(bǔ)加實(shí)驗(yàn)所需的引物和模板后即可進(jìn)行PCR反應(yīng)，可最大限度的減少人為誤差，具有快速簡便、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)。用于高保真的DNA片段的擴(kuò)增。使用該產(chǎn)品得到的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物為平滑末端，不可以直接用于TA克隆，要通過平滑末端克隆法進(jìn)行克隆。
● 質(zhì)量控制：
以λ DNA為模板，可以很好擴(kuò)增5kb的DNA片段；以水稻基因組為模板，可以很好擴(kuò)增3.2kb的DNA片段。
● 使用說明：
1. 冰浴中徹底融化2×MasterMix，混勻后Minispin將溶液收集到管底。
2. 按照下表在0.2ml PCR管中制備反應(yīng)體系：
|
|
50μl反應(yīng)體系
|
終濃度
|
|
2×MasterMix
|
25μl
|
1×
|
|
上游引物 10μM
|
1-5μl
|
0.2-0.8 μM
|
|
下游引物 10μM
|
1-5μl
|
0.2-0.8 μM
|
|
模板
|
× μl
|
10pg-1μg
|
|
水
|
補(bǔ)至50μl
|
|
3. 快甩離心將反應(yīng)液收集到管底。
4. PCR儀如果沒有熱蓋加熱的話，補(bǔ)加25μl礦物油。
5. PCR儀上執(zhí)行以下程序：
|
步驟
|
溫度
|
時(shí)間
|
循環(huán)數(shù)
|
|
初始變性
|
94℃
|
5 min
|
1
|
|
變性
|
94℃
|
30 sec
|
25-40*
|
|
退火
|
Tm-5℃*
|
30 sec
|
|
延伸
|
72℃
|
0.5kb/min
|
|
最后延伸
|
72℃
|
5 min
|
1
|
*注： PCR 反應(yīng)條件視模板、引物等的結(jié)構(gòu)條件不同而各異。在實(shí)際操作中需根據(jù)模板、目的片段的大小、堿基序列和引物的長短等具體情況，設(shè)定最佳的反應(yīng)條件（溫度、時(shí)間等）。
6. 電泳檢測。
注：使用含染料的2×MasterMix可以直接上樣；不含染料的2×MasterMix要與6×loading buffer混合后上樣。